山西农业大学学报(自然科学版)

2018, v.38(03) 36-42

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杜氏盐藻电击转化体系的优化
Optimization of an electroporation-mediated transform system of Dunaliella salina

宋程飞;郝敬云;程蔚兰;史飞飞;季春丽;李润植;

摘要(Abstract):

[目的]构建盐藻高效遗传转化体系,以利于在细胞内组装靶标代谢途径,进而以盐藻为生物反应器规模化生产类胡萝卜素、生物燃油等高值产品。[方法]以杜氏盐藻(Dunaliella salina)为受体,以来源于高油植物斑鸠菊(Vernonia galamensis)编码DGAT酶的基因VgDGAT1a为靶基因,以pCAMBIA3301为表达载体,利用电击法进行遗传转化,优化转化条件和相关参数,并对转化体进行分子检测。[结果]杜氏盐藻对除草剂草铵膦敏感,固体和液体培养筛选阳性转化体的草铵膦浓度分别为20mg·L~(-1)和40mg·L~(-1)。优化的盐藻电转化技术条件包括:培养7d的藻细胞为受体,质粒浓度6mg·L~(-1),电击参数为0.4kV和4ms。盐藻转化率达2.63‰,比现有转化效率提高约1.14倍。分子检测显示靶基因VgDGAT1a基因成功转入杜氏盐藻并高效表达。[结论]建立的优化电击转化方法显著提高了盐藻转化效率,在高等植物遗传转化中,常用的抗除草剂草铵膦Bar基因可用作盐藻基因转化的选择标记,植物表达载体pCAMBIA3301亦可用于盐藻遗传转化。

关键词(KeyWords): 杜氏盐藻;;遗传转化;;电击法;;VgDGAT1a基因

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 国家自然科学基金(30971806;31201266和31401430);; 国家“948”项目(2014-Z39);; 山西省煤基重点科技攻关项目(FT-2014-01);; 山西省重点研发计划重点项目(201603D312005)

作者(Author): 宋程飞;郝敬云;程蔚兰;史飞飞;季春丽;李润植;

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